紫薇（钟嘉欣饰）是天庭的百花仙子，某日，她偷偷降临凡间，遇见了名为丁辰（梁荣忠饰）的男子。不谙世事的紫薇很快就坠入了情网无法自拔，这可急坏了百花宫宫主鲁花（薛家燕饰），她深知神仙和凡人之间的恋情不可能善终，于是想要从中作梗，却在误打误撞之下促成了紫薇和丁辰之间的婚事。郑守业（陈山聪饰）是玩世不恭的富家子弟，觊觎紫薇的美貌，为了得到她不择手段，甚至盗走了鲁花的法宝，使得自己和丁辰的魂魄互换，如果无法在时限之内找回肉身，那么丁辰就将魂飞魄散。另一方面，听信了郑守业的谗言，水神仙（元华饰）和二郎神（李国麟饰）对丁辰展开了追杀。

人心，是一门深奥的科学。人会犯罪作恶，皆因被贪婪、愤怒、软弱和嫉妒等情绪支配。为了逃避刑责，人会利用谎言掩饰真相，用诡计扰乱视线，令法证工作难上加难。未破的悬案、消失的证据、迷失的困局，都是法证团队面对的一个个难关。纵然过程中会受到打击，但他们都会坚持初心，跌倒之后重新出发，不会放弃追寻真相。《法证先锋V》的案件和布局更加让人意想不到，唯有靠着“法证部”、“法医科”及“重案组”这灭罪铁三角，秉承前四季的理念，通力合作，找出真凶，还生者公道，替死者雪冤。

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以香港80年代号称东南亚第一的销金窝“万国城”夜总会为故事舞台，呈现金光闪耀、躁动热烈的香港霓虹时代，一班来自不同阶层的午夜丽人——妈妈桑沙律（陈法蓉饰）、助理大班&警花卧底Michelle（姚子羚饰）、“万国城”头牌Monica（蔡洁饰）等汇聚于此，见证着彼此的浮沉与挣扎、闪亮与熄灭，也卷入了风起云涌的情欲纠葛、江湖争斗之中。